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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Halo Tag 技術(shù)基于融合蛋白標(biāo)簽和合成熒光配基之間共價(jià)鍵的形成，可用于標(biāo)記細(xì)胞或其他生化環(huán)境中的目的蛋白以表征和分析其定位及功能。Halo Tag 報(bào)告基因蛋白是 33kDa 的單體蛋白，是一種經(jīng)基因工程改造、無(wú)催化活性的水解酶衍生物，在生理?xiàng)l件下可以快速和 Halo Tag熒光配體形成不可逆的共價(jià)鍵從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目的蛋白的高特異性標(biāo)記。此技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞、植物、細(xì)菌、酵母和活體模式動(dòng)物等生物體系。

CA-BriDye626 是一款可以高效標(biāo)記Halo Tag基團(tuán)的熒光配體，通過(guò)常用的cy3成像通道激發(fā)，可以獲得非常穩(wěn)定、高強(qiáng)度的熒光信號(hào)，CA-BriDye626 熒光配體不僅具有較高的熒光亮度、較高的光穩(wěn)定性和較低的光毒性，其極佳的生物相容性和高效的細(xì)胞膜滲透能力，使得 CA-BriDye626 熒光配體在哺乳動(dòng)物細(xì)胞、植物、細(xì)菌、酵母和活體模式動(dòng)物等生物體系中有著廣泛的應(yīng)用，并可在除寬場(chǎng)、共聚焦、單分子定位示蹤和 SIM 之外的 STED 超分辨成像體系中進(jìn)行活細(xì)胞或固定細(xì)胞熒光成像。

實(shí)驗(yàn)步驟

*所有 CA 系列染料必須依賴 HaloTag 蛋白質(zhì)標(biāo)簽系統(tǒng)工作，在使用熒光配基染色前請(qǐng)先 確認(rèn)成像生物體系已正常表達(dá) HaloTag 標(biāo)簽蛋白。

1. 在 CA-BriDye 566/626 干粉產(chǎn)品中加入 5 μL（5 nmol 包裝）/2 μL（2 nmol 包裝）新鮮干 燥的細(xì)胞級(jí)別 DMSO 或 DMF 溶劑，充分混合均勻，得到 1 mM 母液（請(qǐng)按照產(chǎn)品規(guī)格 調(diào)整溶劑加入量）。

2. 將培養(yǎng)基預(yù)熱至 37 ℃，將 CA-BriDye 566/626 母液按照 1000-10000 倍稀釋比例加入到 預(yù)熱的培養(yǎng)基中（對(duì)于單分子示蹤等稀疏標(biāo)記體系稀釋比例可達(dá) 107 -109 倍），稀釋后的 染液應(yīng)盡快使用，久置后可能導(dǎo)致部分染料分解或沉淀。

3. 吸去已經(jīng)表達(dá) Halo-Tag 蛋白細(xì)胞的培養(yǎng)基，更換為稀釋好的染液，在培養(yǎng)箱中孵育 30- 120 分鐘后用預(yù)熱的培養(yǎng)基或 PBS 緩沖液清洗細(xì)胞 1-3 次后用于熒光成像。 

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