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產(chǎn)品簡介

Halo-Tag 技術(shù)基于融合蛋白標(biāo)簽和合成熒光配基之間共價(jià)鍵的形成，可用于標(biāo)記細(xì)胞或 其他生化環(huán)境中的目的蛋白以表征和分析其定位及功能。Halo-Tag 報(bào)告基因蛋白是 33kDa 的 單體蛋白，是一種經(jīng)基因工程改造、無催化活性的水解酶衍生物，在生理?xiàng)l件下可以快速和 Halo-Tag 熒光配體形成不可逆的共價(jià)鍵從而實(shí)現(xiàn)對目的蛋白的高特異性標(biāo)記。此技術(shù)已經(jīng)廣 泛應(yīng)用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞、植物、細(xì)菌、酵母和活體模式動(dòng)物等生物體系。

CA-BriDye666 Ligand 是以硅羅丹明為母體的免洗熒光配體，與 HaloTag 蛋白結(jié)合后熒 光信號可開啟 70 倍；與 660 nm 白激光完美匹配，也可以適用于 640 nm 或 647 nm 激光器。 水溶性橋環(huán)助色團(tuán)賦予其極高的熒光亮度、光穩(wěn)定性（徹底抵抗光藍(lán)移）及較好的細(xì)胞膜滲透 能力；目前已廣泛應(yīng)用于寬場、共聚焦、單分子示蹤和 SIM 超分辨成像等多種模態(tài)的成像系統(tǒng)中，其較好的生物相容性使其可以應(yīng)用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞、活體斑馬魚等生物體系，相比 CASiR、CA-JF646 等熒光配體具有顯著提升的信噪比。

實(shí)驗(yàn)步驟

*所有 CA 系列染料必須依賴 HaloTag 蛋白質(zhì)標(biāo)簽系統(tǒng)工作，在使用熒光配基染色前請先確認(rèn)成像生物體系已正常表達(dá) HaloTag 標(biāo)簽蛋白。

1. 在 CA-BriDye 666 干粉產(chǎn)品中加入 5 μL（5 nmol 包裝）/2 μL（2 nmol 包裝）新鮮干燥的 細(xì)胞級別 DMSO 或 DMF 溶劑，充分混合均勻，得到 1 mM 母液（請按照產(chǎn)品規(guī)格調(diào)整 溶劑加入量）。

2 .將培養(yǎng)基預(yù)熱至 37 ℃，將 CA-BriDye 666 母液按照 1000 倍稀釋比例加入到預(yù)熱的培養(yǎng) 基中（對于單分子示蹤等稀疏標(biāo)記體系稀釋比例可達(dá) 107 -109 倍，建議從 1000 倍稀釋起 進(jìn)行染色條件的測試），稀釋后的染液應(yīng)盡快使用，久置后可能導(dǎo)致部分染料分解或沉淀。

3. 吸去已經(jīng)表達(dá) Halo-Tag 蛋白細(xì)胞的培養(yǎng)基，更換為稀釋好的染液，在培養(yǎng)箱中孵育 15-30 分鐘后可以在不更換培養(yǎng)基的條件下直接進(jìn)行免洗成像；也可以用預(yù)熱的培養(yǎng)基或 PBS 緩沖液清洗細(xì)胞 1-3 次后用于熒光成像。

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